Analisis Senyawa

ANALISIS ASAM FITAT (Phytic acid)

Asam fitat terutama dalam bentuk garamnya banyak terdapat dlm serealia (pd kulit ari = bran layer), dalam kacang-kacangan, dan kelapa. Asam fitat merupakan senyawa mio-inositol-hexafosfat. Senyawa ini stabil thdp ber-bagai perlakuan dlm pengolahan pangan, dan bersifat mengikat mineral (àmengendap) shg dpt mengganggu penyerapan mineral dlm usus yg berakibat menyebabkan defisiensi .

Analisis asam fitat didasarkan pd pengendapannya sbg garam Fe :

·         Ditimbang 2 gr sampel (40mesh) dlm erlenmeyer 125ml, tambah 40 ml TCA (CCl₃COOH) 3%, gojog selama 45 mnt

·         Sentrifugasi pd 12000xG selama 10 mnt. Pindahkan 10ml aliquot supernatant ke tabung sentrifuse bersih, kmd tambah 5 ml lart FeCl₃ dng cepat, kmd panaskan dlm waterbath mendidih selama 1 jam

·         Bila dlm 30 menit supernatant tidak jernih, tambah 2-1 tetes lart 3% Na₂SO₄ dlm TCA 3% & lanjutkan pemanasan

·         Sentrifus selama 10-15 mnt, supernatan jernih dibuang, endapan dicuci dng 20 ml TCA 3%, panaskan 5-10 mnt dan disentrifus lagi à supernatan dibuang .

·         Ulangi pencucian dng aquades, sentrifugasi à supernatan dibuang à endapan diaduk dng 5 ml aquades dan ditambah 5 ml 0.6N NaOH

·         Panaskan dlm waterbath mendidih 45 mnt à semua Fe(OH)₃ mengendap à sentrifugasi 10-15 mnt à supernatan dibuang à endapan dicuci dng aquades à sentrifugasi dan supernatan dibuang

·         Endapan dilarutkan dlm 5ml 0.5N HCl dng pemanasan waterbath mendidih 10-15 mnt à warna kuning jernih à pindah ke labu ukur 100ml à encerkan dng HCl 0.5N sampai tanda

·         Dipipet 1 ml larutan tsb ke labu ukur 25 ml à tambah 1ml lart 10% hidroxilamin-HCl (NH₂OH-HCl), gojog pelan² bbrp menit à kmd tambah 9.5ml 2M Na-asetat + 1ml lart O-fenantrolin 0.1% kmd encerkan dng aquades sampai tanda.  Biarkan + 5 mnt dan baca Absorbansi pd 510 nm

·         Perhitungan :

mgr as.fitat = [A/0.783 – 0.007]x2.9546x f_pengenceran 

Cara lain :

     Bobot fitat = [BM fitat/(4xBA Fe)]x bobot Fe x f_pengenceran 

                     = [660/(4x56)]x bobot Fe x f_pengenceran 

  

ANALISIS HIDROSIANIDA (HCN)

Hidrosianida merupakan seyawa beracun yang berasal dari hidrolisis senyawa glikosianida (=cyan-glycosides) yg sering terdapat dlm bahan hasil pertanian .

Secara kualitatif HCN dpt dideteksi dng asam pikrat dlm kondisi alkalis :

·         Rendam 50gr bahan yg ditumbuk dng 50 ml air dlm erlenmeyer 250ml dan + 10 ml 5% as.tartrat

·         Kertas saring 1x7 cm dicelupkan dlm lart as.pikrat jenuh, kmd dikering-anginkan à basahi dng lart 8% Na₂CO₃ dan digantung dileher dalam erlen-meyer à ditutup, kertas jangan menyentuh cairan di bawahnya

·         Panaskan di waterbath 50^oC selama 15 mnt, bila warna kuning-oranye kertas pikrat berubah merah à ada HCN .

ANALISIS KUANTITATIF  HCN (Cara 1)

·         Timbang 10-20 gr sampel halus (20 mesh), tambahkan 100 ml aquades dlm labu Kjeldahl, rendam 2 jam

·         Tambah lagi 100ml aquades à distilasi dng uap (steam). Tampung distilat dlm erlenmeyer berisi 20ml NaOH 2.5%

·         Setelah distilat mencapai 150ml, tambah 8ml NH₄OH, 5ml KI 5% dan dititrasi dng 0.02N AgNO₃ sampai terjadi kekeruhan (letakkan kertas karbon hitam dibawah labu titrasi).

ANALISIS KUANTITATIF  HCN (Cara 2)

·         Timbang 10-20gr sampel halus (20 mesh), tambah 100ml aquades dlm labu Kjeldahl à rendam selama 2 jam

·         Tambah lagi 100ml aquades à distilasi dng uap (steam). Tampung distilat dlm erlenmeyer berisi 20ml 0.02N AgNO₃ dan 1ml HNO₃

·         Setelah distilat mencapai 150ml àdisaring dng krus Gooch endapan yg mung-kin ada dicuci dng air

·         Kelebihan AgNO₃ dlm distilat dititrasi dng 0.02N K-tiosianat dng indikator lrt ferri

·         Buat titrasi blanko pd 20ml lart standar 0.02N AgNO₃  

1 ml AgNO₃  = 0.54 mg HCN

                          

ANALISIS FORMALDEHID & METHANOL (CH₃OH)

Formaldehid (formalin) merupakan salah satu bahan kimia yg sering digunakan utk/ pengawet preparat jaringan hewan dan (mayat) manusia. Namun (dahulu) sering ditemui bahan ini ditambahkan sebagai pengawet tahu. Methanol sering terdapat dalam hasil fermentasi pulp buah atau sari buah, sbg hasil reaksi demetilasi (=demetoxilasi) pektin. Formalin dan methanol dapat dideteksi (kuali-tatif) sbb :

Reagensia : Lart. asam khromotropat –larutkan 5mg asam khromotropat (asam 1,8-dihidroksi-naftalena-3,6-disulfonat) dlm 10ml campuran as.sulfat pekat + aquades (9:4)

Prosedur :

·         Pipet 2 tetes sampel ke dlm 2 tabubg reaksi, tabung 1 + 1 tetes air + 1 tetes lart as.fosfat + 1 tetes lart KmnO₄ àbiarkan 1 mnt à tambah lart NaHSO₃ tetes demi tetes sampai warna permanganat hilang. Bila warna coklat tak hilang tambah 1 tetes lart as.fosfat  .

·         Ke dlm kedua tabung tambah 5ml lart as.khromotropat yg baru dibuat à panaskan pd waterbath 60^oC, 10 menit.

·         Bila timbul warna ungu di kedua tabung menunjukkan adanya formalin dan mungkin juga methanol. Bila warna tsb hanya timbul di tabung 1 berarti hanya ada methanol.

Cara lain analisis metanol kualitatif

·         Ambil 5 ml sampel + 2 ml lart KmnO₄ (3gr dlm 15ml lart as.fosfat 85% à dijadikan 100ml) à dibiarkan 10 mnt

·         Tambah 2 ml as.oksalat (5gr à100ml as.sulfat 1:1) . Larutan tak berwarna à tambah 5ml reagen Schiffs (0.2gr Fuchsin + 120ml aquades à dipanaskan à tambah NaHSO₃ 10% à lartn tak berwarna) à biarkan 10mnt

·         Bila sampel mengandung methanol, akan timbul warna ungu.

ANALISIS BAHAN PEMANIS SINTETIS

SAKHARIN – Cara Kualitatif

·         Ditimbang 100mg sampel, dilarutkan dlm 5ml NaOH (1:20) à diuapkan sampai kering di atas api kecil

·         Setelah residu dingin dilarutkan dlm 20ml HCl encer (13%) à tambahkan 1 tetes lart 1N FeCl₃ (9 gr FeCl₃.6H₂O + aquades à 100ml)

·         Bila timbul warna ungu berarti ada asam salisilat yg terbentuk dari sakharin .

DULSIN – Cara Kualitatif

·         Larutkan sampel dlm 4 bag air à disaring à dipipet 50-100ml larutan diasamkan dng as.fosfat 25% dan digojog dng khloroform

·         Tambah 5-10gr bubuk tragacanth à gojog kuat-kuat

·         Cairan dituang dan diuapkan à residu dilarutkan dlm lart Na-bikarbonat encer à disaring à filtrat diuapkan àkering

·         Suspensikan residu dlm 5ml air + 1 tetes lart Hg(NO₃)₂ (1-2 gr HgO dicuci à larutkan dlm HNO₃ à tambah NaOH shg endapan tak larut à tambah aquades sampai 15ml à beningan didekantasi).

·         Panaskan 5-10 mnt pd waterbath mendidih à bila dng penambahan sedikit PbO₂ (lead peroxyde) terbentuk warna ungu berarti ada dulsin .

ANALISA BAHAN PENGAWET

Analisis Asam SALISITAT – Cara Kualitatif

·         Larutkan sampel dlm 4 bag air, diaduk, disaring

·         Pipet 50-100ml larutan à asamkan dng as.sulfat 4N à digojog dua kali dng 20ml dan 10ml ether. Larutan etheris dicampur kmd diuapkan pd waterbath atau hot-plate

·         Residu dilarutkan dlm air à separo larutan ditambah bbrp tetea lart Ferri-klorida dan separo yg lain + air broom

·         Bila ada asam salisilat, dng Ferri klorida akan berwarna ungu yg tak hilang dng penambahan spiritus atau sedikit asam cuka; dan dng air broom terbentuk endapan putih

Analisis Asam BENZOAT – Cara Kualitatif

·         Sampel disiapkan sama dng pd analisis as.salisilat diatas

·         Residu yg diperoleh ditambah 10 tetes as.sulfat pekat atau dng 1 tetes as.nitrat berasap (HNO₃ 65%) atau dng 50mg KNO₃ à dipanaskan pd 180^oC selama 3 menit àdinginkan

·         Alkaliskan dng lart ammonia dan à didihkan à setelah dingin tambah (NH₄)₂S atau 40mg hidroxilamin-HCl

·         Timbulnya warna coklat menunjukkan adanya asam benzoat .

  

ANALISIS SENYAWA TANNIN

·         Ditimbang 5gr sampel halus dan ditambah 400ml aquades àdidihkan selama 30 mnt àdinginkan à encerkan sampai tepat 500ml à disaring

·         Dipipet 10ml filtrat-1  ditambah 25ml lart indigokarmin (6gr Na-indigotin-disulfonat + aquades à 500ml àpanaskan àdinginkan + 50ml as.sulfat + aquadest sampai 1Lt à disaring) dan 750ml aquades. Kmd dititrasi dng lart 0.1N KMnO₄ sampai warna kuning emas à misal A ml

·         Diambil 100ml filtrat-1 ditambah 50ml lart gelatin (25gr gelatin + 500ml NaCl jenuh àpanaskan sampai larut àtambah NaCl jenuh sampai 1000ml) kmd ditambah 100ml lart garam-asam + 10gr kaolin bubuk à gojog kuat-kuat bbrp menit à disaring à filtrat-2

·         Dipipet 25ml filtrat-2 à ditambah 25ml lart indigokarmin dan 750ml aquades, kmd dititrasi dng lart 0.1N KmnO₄ à misal = B ml

·         Standardisasi Lart KMnO₄ dng Na-oxalat

1ml KMnO  0.1N ~ 0.00416 gr tannin

                             (50A – 50B) x N/0.1 x 0.00416

     Kadar tannin =                                                            x 100%

                                                5

N = normalitas KMnO₄

ANALISIS NIKOTIN

Nikotin, C₁₀H₁₄N₂ dng BM = 162.23  berasal dari daun tem-bakau (Nicotiana tabacum dan N. rustica ). Daun keringnya mengandung 2-8% nikotin yg mem-bentuk garam dng asam sitrat dan malat. Extrak nikotin berupa cairan seperti minyak tak berwarna – kuning pucat yg akan menjadi coklat bila terkena udara atau cahaya. Sangat higroskopis dan mudah membentuk garam dng semua asam. Sangat mudah larut dlm alkohol, khloroform, ether, pet.ether, kerosen, dan minyak nabati .

Analisis kuantitatif :

·         Pindahkan 1gr sampel bubuk ke dlm erlenmeyer 50ml bertutup dan + 1ml lart 20% NaOH dng pipet ukur à campur merata dng gelas pengaduk à tambah 20ml pet.ether dan ditutup rapat à gojog homogen

·         Diamkan 2 jam shg lapisan ether bag atas jernih àdipipet 10ml cairan ether dan pindahkan ke erlenmeyer bersih –

·         Uapkan ether pd waterbath shg volume tinggal 2ml à tambah 10ml aquades + 2 tetes indikator metil merah

·         Titrasi dng 0.01N HCl shg warna hijau-kekuningan berubah menjadi merah muda

1 ml HCl 0.01N ~ 1.6223 mg nikotin

ANALISIS KAFEIN

Kafein, memiliki rumus C₈H₁₀N₄O₂ dng BM= 194.19 ; tdpt dlm bahan alami: daun teh, biji kakao, biji kopi, dan biji kola. Kafein menstimulir syaraf dan jantung ttp memiliki efek samping rasa gelisah (neurose), sulit tidur (insomnia), dan denyut jantung tak beraturan (berdebar). Satu gram kafein akan larut dlm : 1,5ml air 100^oC; 5.5ml air 60^oC; 46ml air 25^oC; 5,5ml khloroform; 22ml alkohol 60^oC; 66ml alkohol 25^oC; 50ml aseton; 100ml benzen; 530ml eter.

Prosedur Analisis KAFEIN - Cara Bailey-Andrew

·         Ditimbang 5gr sampel halus (30 mesh) ke dlm erlenmeyer à + 5gr MgO + 200ml aquades

·         Pasang pendingin balik à didihkan pelan-pelan 2 jam à dinginkan kmd encerkan shg tepat 500ml à disaring

·         Dipindahkan filtrat 300ml ke labu godog + 10ml As.sulfat (1:9) à didihkan sampai volume tinggal 100ml

·         Cairan dimasukkan corong pemisah à labu godog dibilas as.sulfat (1:9) dan digojog berkali-kali dng khloroform berturutan menggunakan 25, 20, 15, 10, 10, dan 10ml . Semua cairan dimasukkan ke corong pemisah, kmd ditambah 5ml KOH 1% à digojog dan dibiarkan sampai cairan terpisah jelas à cairan bag bawah dikeluarkan ke dlm erlenmeyer (=1)

·         Corong pemisah ditambah lagi 10ml khloroform à digojog à dibiarkan sampai terpisah jelas à cairan bawah dikeluarkan dicampur dng (=1). Pencucian diulang 1x lagi .

·         Larutan dlm khloroform (=1) diuapkan solvennya pd waterbath shg tinggal residunya à dikeringkan dlm oven 100 ^oC sampai bobot konstan (~ bobot kafein kasar)

·         Kadar kafein murni dapat ditentukan dng analisis kadar N secara mikro Kjeldahl atau cara-cara lain

Perhitungan :

                         Kafein dlm bahan = gr N x 3.464 x 500/300